4.2 Corte y unión de moléculas de ADN

Los plásmidos son pequeñas moléculas de DNA (de 5.000 pb aproximadamente) que se replican en forma autónoma en células bacterianas.

Son círculos covalentemente cerrados de DNA de doble cadena. La mayoría de los plásmidos contienen genes resistentes a antibióticos, los que permiten el crecimiento de células bacterianas refugiando a los plásmidos bajo condiciones selectivas. Los ejemplos de genes resistentes a antibióticos son los que codifican para la ß lactamasa o neomicina fosfotransferasa, enzimas que inactivan ampicilina o aminoglucósidos respectivamente.

Los plásmidos contienen uno o más genes de resistencia a antibióticos y son capaces de autorreplicarse, ya que contienen una secuencia de iniciación. Esto les permite replicarse de manera independiente del ADN genómico. Debido a su tamaño relativamente pequeño, los plásmidos contienen solo algunos únicos sitios de clivaje de enzimas de restricción. Luego de la digestión de un plásmido en un único sitio de restricción el plásmido circular se vuelve lineal.

Se puede crear una molécula de ADN recombinante usando un plásmido. Este proceso consta de las siguientes etapas:

1. Se corta el ADN circular del plásmido con enzimas de restricción, para generar extremos cohesivos.

2. Se corta el ADN que se quiere multiplicar. Asegurándose que los extremos del plásmido y los del ADN a insertar sean complementarios y puedan unirse.

3. Se une el gen que se desea introducir (inserto) por medio de la enzima ADN-ligasa y luego se introduce el plásmido inserto en bacterias.

4. Se selecciona las bacterias que hayan introducido el plásmido con la ayuda de antibióticos. Dado que los plásmidos contienen un gen de resistencia a antibiótico, al exponer las bacterias a ese antibiótico, sólo las que hayan incorporado el plásmido (y con él la resistencia) sobrevivirán, mientras que las que no lo tengan morirán. Esta es una manera relativamente eficaz de obtener millones de copias del ADN incorporado. Dado que todas las copias del gen provienen de una sola molécula multiplicada a partir de una única bacteria que dio origen a la colonia, esta técnica lleva el nombre de clonación.

Bibliografía

ü  Http://recursos.cnice.mec.es/biosfera/alumno/2bachillerato/biotec/contenidos5.htm

ü Http://es.wikipedia.org/wiki/ADN_recombinante